Mens Gru, en tidligere superskurk, holder på å tilpasse seg livet som familiefar og syltetøyselger, blir et hemmelig laboratorium i Arktis stjålet. Ligaen for antiskurker innser at de trenger hjelp fra en ekspert, og rekrutterer en noe motvillig Gru. Sammen med den eksentriske antiskurkagenten Lucy Wilde konkluderer Gru med at den hovedmistenkte er den antatt avdøde superskurken El Macho.