Harley Quinn (KALEY CUOCO) hat nun mit dem Joker (ALEX TUDYK) ein für alle Mal Schluss gemacht und versucht es in der halbstündigen Actioncomedy-Serie als krimineller Queenpin von Gotham City alleine zu schaffen. Die Serie zeigt Harley Quinn, Poison Ivy und eine ganze Besetzung von Helden und Schurken, alt und neu, aus dem DC-Universum.